【产品名称】非洲猪瘟病毒（ASFV）荧光PCR检测试剂盒

【试剂盒组成】

【作用与用途】本试剂盒采用PCR方法结合荧光探针的体外扩增和检测技术，适用于检测样品中的ASFV DNA，用于非洲猪瘟的辅助诊断。

【使用方法】

1． 样品处理（样品处理区）

阴、阳性对照无需提取，直接加样。

1.1  若样品为液体，取20 ul样品，加入Buffer A和Buffer B各100ul，漩涡混匀；12000 rpm 离心2 min，取上清液作为模板即可直接检测。

1.2  若样品为组织，取5-10 mg组织（大小约为半个绿豆）放于100 ul Buffer A中，充分研磨混匀；向研磨混合物中进一步加入100 ulBuffer B，漩涡混匀；12000 rpm 离心2 min，取上清液作为模板即可直接检测。

2.  扩增试剂准备（PCR前准备区）

从试剂盒中取出ASFV PCR反应液、Taq酶,室温融化并振荡混匀后，2000rpm离心10 sec。

假设所需要的PCR反应管管数为n（n = 样品数 +1管阴性对照 + 1管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：

计算好各试剂的使用量，加入到一适当体积的离心管中，充分混合均匀，2000 rpm离心10 sec；向设定的n个PCR 反应管中分别加入24ul，转移至样品处理区。

3． 加样（样品处理区）

向所设定的n个PCR反应管中分别加入步骤1中提取的DNA、阴性对照、阳性对照各1ul，盖紧管盖，将PCR 反应管转移至检测区，置于PCR仪上，记录样品摆放顺序。

4． PCR扩增（检测区）

4．1．循环条件设置

1．95℃:3min

2．95℃:5sec，60℃:20sec（收集荧光）：45循环

反应体系为25ul。

4．2．仪器检测通道选择 荧光信号收集时设定为Fam荧光素。

【注意事项】

1．有关实验室管理规范请严格按照行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理规范执行。

2．各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染，实验结束后立即清洁工作台。

3．反应液分装时应尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。

4． 实验中用过的吸头请直接打入盛有1%次氯酸钠的废物缸内，与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。

5．工作台及各种实验用品应定期用1%次氯酸钠、75%酒精或紫外灯进行消毒。

【规格】48Tests/盒

【贮藏与有效期】核酸提取试剂室温保存；其他试剂-20℃保存。有效期为一年（请于有效期内使用）。

【生产企业】肇庆大华农生物药品有限公司

地址：广东省肇庆高新技术产业开发区创业路5号

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