1.1 病料来源及处理

从四川、云南、广西区域5个发病鸡场按要求物流快件或专人送检冷藏的典型肿头鸡头，3天内货到实验室进行病原菌的分离鉴定。

1.2 副鸡禽杆菌地方病原菌株的分离鉴定

先对送检的各个发病肿大鸡头进行副鸡禽杆菌通用基因引物、ABC三血清型区分专用基因引物进行PCR扩增鉴定；对鉴定出含有副鸡禽杆菌核酸的病鸡头进行病原菌的分离鉴定和纯化培养。

1.3 地方分离菌株的毒力测定

将分离菌株分别接种一耳环到各自的10mL专用液体培养基上，按课题组优化的相同培养条件进行相同时间的增殖，用OD值计数法配取一定量活菌数的菌液感染100天龄SPF鸡分组测定各菌株的半数感染量(LD50)；感染方式为每只鸡眶下窦注射菌液0.2mL，设空白对照组；第二天起观察连续7天，出现鸡肿头或流泪者判断为阳性感染。

1.4  2个B型菌株的相互免疫保护试验

从分离的5株B型菌株选出毒力最强的SC01菌株和居中毒力的GX02菌株，按照<鼻康安>半成品生产的培养条件和要求制做SC01株和GX02株的合格半成品，并用相同菌数及按鼻康安疫苗的制作工艺标准制成了SC01株和GX02株单价苗；将72只SPF鸡10天龄时免疫禽流感(H5+7)三价苗, 30天龄时分成7组, 每组10只，第1-2组和第3-4组于40天龄和70天龄时分别免疫SC01株和GX02株单价苗0.5mL/只， 100天龄时第1、3 、5组用半数感染量浓度的SC01菌眶下窦注射菌液0.2mL/只，第2、4、6组用半数感染量浓度的GX02菌眶下窦注射菌液0.2mL/只，第7组设为注射灭菌蒸馏水0.2mL/只的空白对照组；第二天起观察连续7天，出现鸡肿头或流泪者判断为阳性感染。

2.1 副鸡禽杆菌地方分离株情况

经纯化及PCR鉴定，分离到5株B型副鸡禽杆菌，并命名保存为SC01株、SC02株、YN01株、GX01株、GX02株。同时表明B型菌是西南地区的主流致病菌。

2.2 5株副鸡禽杆菌的半数感染量（结果见表1）

表1  5株副鸡禽杆菌的半数感染量(CFU/ml)

数据显示流行致病的B型菌间毒力差异较大。

2.3 SC01株和GX02株的相互免疫保护情况（结果见表2）

表2   SC01株和GX02株的相互免疫保护结果

结果显示SC01株对流行致病菌株有很好的免疫保护力。

3.1 西南地区存在较广泛的B型副鸡禽杆菌感染，且感染菌株间毒力有较大差异，有的相差30倍以上。

3.2 SC01株与GX02株同为B型菌，但两者间的保护性抗原差异近30%，显示B型菌间还存在有较大变异。

3.3 SC01菌株毒力强、免疫保护力好且广，是一个性能优良的疫苗候选株。